2 Type elektroforesemetoder av serumproteiner (med figur)

Serumet har en rekke proteiner. I 1937 introduserte Arne W Tiselius metoden for separasjon av de forskjellige proteinene i et elektrisk felt.

Ved elektroforese separeres proteinene i et elektrisk felt. Senere ble sonelektroforese i papir eller celluloseacetat utviklet. I 1952 ble en to-trinns metode utviklet som kombinerte elektroforese med immunodiffusjon. Etterpå introduserte C Williams, P Graber og M Poulik den klassiske metoden for immunoelektroforese (hvor både elektroforese og dobbelt immunodiffusjon utføres på samme agarbelagte glidelås).

1. Soneelektroforese:

Proteiner kan separeres på grunnlag av deres overfladiske elektriske ladninger. Et inert støttemiddel som papir, celluloseacetat eller agar brukes til separasjonen. Serumprøven plasseres på støttemediet. Støttemediet er så forbundet med de positive og negative poler av elektroforeseapparatet. Under det elektriske feltet blir proteinene ladet og beveger seg over støttemidlet. Bevegelsen avhenger av deres elektriske ladning.

Siden forskjellige proteinmolekyler har forskjellige ladninger, beveger de seg til forskjellige stillinger i støttemidlet. Vanligvis utføres elektroforese i 60-120 minutter eller mer. Da blir proteinene farget og undersøkt visuelt eller skannet i et densitometer. Densitometer-skanning av de separerte og farget proteinfraksjonene omdanner hvert bånd til mønster i sin karakteristiske topp og hjelper til kvantifisering av hver proteinfraksjon.

2. Serumproteinelektroforese:

Normalt humant serum er separert i fem store elektroforetiske bånd: albumin, α 1 -globulin, a 2 -globulin, β-globulin og y-globulin (figur 27.5).

Soneelektroforese er nyttig ved diagnostisering av visse menneskelige sykdommer:

Fig. 27.5A til C:

Elektroforese på celluloseacetatstrimmel og densitometer skanning av celluloseacetatpapirstrimmel: A og A1: Normale serumproteinbånd på cellulær acetatstrimmel visualisert etter farging (A) og densitometer skanning fra celluloseacetatstrimmel (A1).

B og B1: Hypergammaglobulinemi

C og C1: Hypogammaglobulinemi

Jeg. Multipelt myelom og Waldenstroms makro-globulinemi. I disse sykdommene forekommer en elektroforetisk begrenset proteinpike vanligvis i y-globulin-regionen. Spiken representerer en akkumulering av en monoklonal immunoglobulin. De monoklonale immunoglobulinene har en definert overfladelading, og dermed blir en spike fremstilt (mens det normale mønsteret av polyklonale immunoglobuliner gir et smelte i y-globulinområdet).

ii. Hypogammaglobulinemi (markert reduksjon i serum gamma globulin).

iii. Hypoproteinemi (markert reduksjon i alle serumproteiner).

iv. hypoalbuminemi:

Reduksjon av albumin, som forekommer i mange sykdommer i lever og nyre.

v. Elektroforese av urin hjelper i påvisning av frie immunglobulin-lette kjeder, som for eksempel Bence-Jones-protein.

vi. Soneelektroforese av cerebrospinalvæske (CSF) hjelper til med diagnostisering av multippel sklerose og andre lidelser i sentralnervesystemet. Serumproteinelektroforese betraktes som en screeningsanalyse for påvisning av proteinabnormaliteter. Videre analyse er nødvendig for å finne de spesifikke abnormaliteter.