Fluorescerende i situ-hybridisering (FISH)

I denne artikkelen vil vi diskutere om Fluorescerende i situ-hybridisering (FISH).

Det er en laboratorieteknikk som brukes til å bestemme hvor mange kopier av det spesifikke segmentet av DNA som finnes i en celle. Den identifiserer spesifikk kromosomal region i cytologiske preparater. I laboratoriet er et segment av DNA kjemisk modifisert eller farget med fluorescerende fargestoffer, og når det undersøkes under fluorescerende mikroskop, ser det veldig lyse fluorescerende.

Fluorescens in situ hybridisering har i stor grad økt sensitiviteten, spesifisiteten og oppløsningen av kromosomanalyse.

Fordelene ved denne teknikken er mange, men noen er nevnt som følger:

(1) Oppløsningen av denne metoden er mye bedre enn tradisjonell kromosombånding og omtrent 2 megabaser (Mb) i lengde.

(2) Protokollen til denne teknikken er enkel og er anvendelig for både deling av celler så vel som ikke-delende celler. Denne teknikken kan identifisere en rekke mutasjoner, inkludert sletting, duplisering, aneuploidi og tilstedeværelse av derivatkromosomer. Denne teknikken brukes også ofte til å overvåke tilbakevendende eller gjenværende sykdom hos beinmargtransplanterte pasienter.

FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) utføres vanligvis på stimulert perifert blod for både kromosomanalyse og identifisering av spesifikk translokasjon og deletjon. For eksempel er det brukt til å demonstrere Philadelphia kromosom (Ph ¹ ) dannet ved translokasjonen mellom kromosom 9 og 22 og forårsaker kronisk myelogen leukemi (CML).

Det brukes også til identifisering av translokasjonen mellom kromosom 8 og 14 som forårsaker Burkitts lymfom og mellom kromosom 18 og 14 som resulterer i B-celle leukemi. Det brukes også til diagnose av Downs syndrom.

I FISH-prosedyren kan cellekulturer fremstilles. Metafasen / prometafase kromosomene er festet på en glideskinne. I tillegg kan FISH modifiseres for analyse av interfase-kjerner. Deretter blir kromosomene denaturert; en merket DNA-probe blir så introdusert og så sond hybridisert til kromosomet på lysbildet. Derfor er termen "in situ" hybridisering gitt.

DNA-probene er merket med fluorokrom, slik at proben gir fluorescerende signal og kan ses med fluorescensmikroskopi. Fluorescensen kunne trekkes ved hjelp av filtre festet i fluorescerende mikroskop.

FISH-prober er omtrent 40 kilo baser (kb) i lengde, og detekteres som et dobbelt fluorescerende signal på hvert medlem av et kromosompar. Dobbelpunktet tilsvarer signalene fra hver av de to justerte søsterkromatider.

I sin enkle applikasjon vil et normalt FISH-mønster for en slik sonde være to sett med dobbeltpunkter, ett sett for hvert medlem av de normalt sammenkoblede kromosomer. Disse dobbeltpunktene smelter ofte til å danne et signal. Celler monosomiske for den aktuelle kromosomale regionen ville bare vise et enkelt sett med dobbeltpunkt per kjerne, mens trisomceller ville vise tre sett med dobbeltpunkter.