Kryopreservering av gameter i fisk

I denne artikkelen vil vi diskutere om cryopreservering av gameter i fisk.

Kryopreserveringen er en lagringsteknikk med praktisk talt ingen tidsbegrensninger. Bevaring av fisketeametene har blitt forsøkt med denne teknikken. Kryopreserveringen av sæd er en veletablert prosedyre i husdyrhold.

Nå krypteres sædceller med suksess ved inseminering av storfe, hest, gris, sau og fjærfeavl. Det er interessant å merke seg at stor innsats har blitt satt for å overføre denne teknologien til bevaring av sæd, egg og embryoer av fisk.

Denne teknikken vil hjelpe fisk oppdrettere på følgende måter:

(1) Problemet med ikke-tilfeldig modning av hann og kvinne kan overvinne hvis spermier eller egg holdes i lagring.

(2) Programmet for selektiv avl kan gjennomføres som vil forbedre urbefolkningen og vil hjelpe den tredje verden til å avle sine urbefolkede arter og å produsere spesielle stammer av overlegen stilk.

(3) Teknikken for kryopreservering av gameter vil spille en viktig rolle for bevaring av urfolkspermplasma, da mange indiske indiske fisk ikke kan konkurrere med eksotiske fisk. Med denne teknikken blir gametene fra truede arter banket som en sikring mot svindelende genetisk variabilitet forårsaket av miljøforstyrrelser.

(4) Det kan bidra til produksjon av mono-sex-kultur.

(5) Hvis gametene kan bli vellykket, kan vi utvikle fisk gjennom hele året i henhold til vårt krav og kan bidra til å etablere genbank for å bevare genetisk originalitet av befolkningen og holde dem tilgjengelige for gjeninnføring når generelle forhold for overlevelse har blitt bedre.

Spermene, eggene og embryoer kan krypreserveres, men bevaring av egg og embryoer er vanskelig på grunn av utilgjengelighet av kryoskyddsmiddel som skal absorberes tilstrekkelig i disse cellene på grunn av deres store størrelse i forhold til spermatozoa.

Kryopreserveringen av spermatozoa i fisk er vellykket hos mannen; arter Disse artene er Oncorhynchus, Salmo, Salvilinus fontinalis, Hucho hucho, Thymallus thymallus, Esox lucius og Cyprinus carpio, Serothodon mossambicus; Labeo Rohita, Catla Catla og Cirrhinus Mrigala.

Følgende trinn skal følges ved bevaring av spermatozoer:

(1) Samling av milt (sæd).

(2) Fremstilling av forlengelsesoppløsning.

(3) Utvalg av kryoskyddende middel.

(4) Frysing.

(5) Suksess ved befruktning.

Samling av smuss:

Det første trinnet er å samle spermier. Vanligvis samles sædene fra sunne fisk ved strippemetode. Kateteret kan brukes, noe som er bedre alternativ til stripping. De mannlige smørbrødene med de beste karakteristiske egenskapene ble valgt og vasket med Ringers-løsning og kjønnspapillegruppe ble tørket.

Broderen kan være bedøvet eller ikke bedøvet. Anestesien som vanligvis brukes er 0, 3 ml / l fenoksyetanol. Ifølge Kumar (1989) gir en injeksjon av suston 250 (organon) før stripping bedre resultat i indiske karper. Flertallet av arbeidstakere på dette feltet anbefalte un-anaesthetized fisk for stripping for å skaffe milt.

Myren samles i sprøyter eller hemolyserør og senere bevart i glassampuller (forseglet eller uforseglet), plastruller og ofte i plastposer. Farge, volum, tetthet, pH og motilitet av sæd skal merkes.

Prøven skal være fri for urin og fekalitet. En smøring av prøven skal undersøkes under mikroskop for å legge merke til abnormiteter i sædceller. Hvis prøven er OK, legg den til videre behandling, ellers kan fersk prøve fra nye brødere tas.

I løpet av perioden for oppsamling og konservering av spermatozoer, kan sprøyten / ampuller / halm holdes i damvann for å opprettholde konstant temperatur. Legendariske og Billard (1980) samlet spermier i hemolyserør i smeltende is og lagres deretter på en nedkjølt overflate ved 4 ° C.

Utarbeidelse og utvelgelse av forlengelsesmiddel, en løsning der det oppsamles milt, er mest kritisk for kryopreservering. Forsterkeren forhindrer utmattelse av spermieenergi og opprettholder sædceller i lett tilstand, men i live.

Det er to grunnleggende forlengere. De kalles Mounibs medium (M) og Menezo medium (Me). I disse to mediene blir bovin serunalbumin (BSA) og telluritt eggeplomme tilsatt. For indiske fisk ble flere utstøtere prøvd ved å modifisere i deres følgende bestanddeler.

De vanlige bestanddelene er natriumklorid, KCl, CaCl2, NaHC03, Na2HP04 og MgS04. I tillegg til disse er næringsstoffer og glycin også tilsatt for å forbedre kryopreservering. Antibiotika som gentomycin eller streptomycin blir også tilsatt til forlengelsesoppløsningen om nødvendig.

cryoprotectant:

Kryosikringsmiddelets hovedfunksjon er å trenge inn i cellen og kan hjelpe spermatozoa til å tolerere frysetemperatur. Den viktigste og brukte mye er DSMO (Dimetyl sulfoxide) og glyserol. Harvey (1983) brukte metanol, DSMO og glyserol i kombinasjon med melkepulver eller eggeplomme.

Kryosikrings- og forlengelsesoppløsning i et fast forhold, vanligvis er en del av krybeskyttelsesmiddel og ni deler av forlengelsesoppløsning kjent som fortynningsmiddel. I dette fortynningsmaterialet oppsamles sædene for videre behandling for frysing.

Fortynningsmiddelet (kryotbeskyttelsesmiddel + ekstender + spermier) er tatt i polyvinylstråler og begge ender av strøler er forseglet og nå er de klar for frysing eller nedkjøling. Myren kan avkjøles, temperaturen holdes mellom 0-5 ^o C. Ved frysing brukes CO ₂ og flytende nitrogen. Kjølt lagring av teleostmyr (0-50 ^o C) har blitt studert mye i laksefisk.

Ved fryseprosedyre bør mange problemer som for eksempel kaldstøt, dannelse av intracellulær is og osmotisk sjokk kontrolleres. Kryopreserver betyr generelt lagring av celler eller vev ved -196 ^o C, temperaturen av flytende nitrogen (figur 22.1).

Cellskade bør kontrolleres. Tre typer celleskade oppstår vanligvis. Den første er kaldt støt, som skyldes kjøling over frysende temperaturer. Dette er viktigere for egg, ikke veldig viktig for sædceller.

Dette skjer opp til 0 ° C. Når temperaturen går fra 0 ° C til -80 ° C, skjer det osmotiske sjokk og dannelse av intracellulær is i egg og sperm. For vellykket cryopreservation kontrolleres disse tingene.

Kort sagt, straws som inneholder fortynningsmiddel, overføres til cannisters. Cannisterne som holder strover etter å ha tillagt varierende likevektstid, dyppes først i flytende nitrogen damp og deretter til flytende nitrogen ved temperaturen -196 ° C. Legendra og Billard (1980) lagret spermene av regnbueørreder i tørr is (fast CO ₂ -79 ° C) eller i flytende nitrogen opp til 6 måneder.

I en rekke ferskvannsarter har frysing blitt utført ved pelletering, suspendere spermier i tørr is. Overgangen fra 0 ° C til -70 ° C varer i ca 2 minutter, noe som resulterer i en hastighet på 35 ^o C / min. Siden frekvensen senker over - 60 ° C. De beste resultatene oppnås i flytende nitrogen.

tining:

Opptining er omvendt ved frysing. Tining skjer i vannbad ved temperaturer mellom 10 ° C og 60 ° C. Suksessen til hele prosedyren avhenger av motiliteten til spermatozoer og evne til å gjødsle egg.

Stoss og Holtz (1982) har økt motiliteten av rosa laksespermatozoa fra 30 sekunder til 10 minutter ved å aktivere med en 120 nm NaHCO _3- løsning som 1 BMX (3-isobutyl-l-metylxantium) ble tilsatt. Kumar (1989) uttalt at lengden på lagringsperioden er ca 20 dager i L. rohita og H. molitrix under kryogen tilstand.

Eggene av Salmo gairdeneri, Onchorhynchus kisutch og O.keta ble fikset ved å fjerne gjennom prosessen med stripping og forseglet i plastposer sammen med koelomvæske og holdt under oksygen ved 1 ° C. Eggene får så spre seg til å danne et lag ett eller to egg dypt.

Eggene blandes deretter med forlengelsesoppløsning og kryobeskyttelsesmiddel nesten på lignende måte som tidligere beskrevet for sædceller. Ifølge Harvey og Kelley (1984) har frøet (kjølt) lagring av egg vært moderat vellykket i laksefisk, med lagringstider i løpet av noen få uker oppnådd ved kjøling av oksygenholdige egg i koelomvæske.