2 Metoder for elektroimmunodiffusjonsteknikker for antigen og antistoff
I immunodiffusjonsteknikker får antigenet og antistoffet diffusere for å danne en utfellingslinje, og dette tar lengre tid (24-72 timer).
Hvis bevegelsen av antigen og / eller antistoff gjøres raskere, vil utfellingslinjen dannes på svært kort tid, slik at diagnosen kan gjøres raskt. Dette målet oppnås ved å flytte antigenet og antistoffet elektrisk. Det er mange variasjoner av dette prinsippet. De to vanlige metodene som brukes er motstrøms immunoelektroforese og Laurells rakettelektroforese.
Motstrømsimmunoelektroforese (Édimensjonal dobbeltelektroimmunodiffusjon):
To brønner er kuttet i agar på et lysbilde.
↓
En brønn er fylt med antigen og den andre brønnen er fylt med antistoff.
↓
Antistoffsiden av agar er koblet til anoden og antigensiden er forbundet med katoden til elektroforeseapparatet.
↓
Ved påføring av elektrisitet beveger antigen- og antistoffmolekylene (på grunn av deres elektriske ladninger) i agar under den elektriske påvirkning.
I en alkalisk buffer er de fleste av de klinisk viktige antigenene elektronegative og dermed beveger de seg mot anoden (dvs. mot antistoffbrønnen). Antistoffmolekylene er elektrisk nøytrale eller svake negative. Normalt bør de elektriske negative antistoffmolekylene bevege seg mot anoden.
Men bevegelsen av hydronumioner i agar under elektroforese er meget sterk og trekker de svake negative antistoffmolekylene mot katoden (dvs. mot antigenbrønnen). Siden antigen og antistoffmolekyler beveger seg i motsatte retninger, møter de hverandre og danner en utfellingslinje mellom de to brønnene. Utfellingslinjen er synlig i 30 minutter (i motsetning til 24 timer i diffusjon) og er omtrent 10 ganger mer følsom enn diffusjon.
Motstrøms immunoelektroforese brukes til å detektere
en. Meningokokker, kryptokokale og hemofile antigener i cerebrospinalvæsken og
b. Hepatitt B overflateantigen i serumet.
Lauren's Rocket Electrophoresis (Eidimensjonal Single Electroimmunodiffusion):
Denne teknikken brukes til å kvantifisere antigener. Antistoffet blandes med smeltet agar og helles på glassglass. Etter størkning blir brønner kuttet og fylt med forskjellige konsentrasjoner av antigen.
↓
Når strøm blir påført, blir antigenet drevet inn i de agarholdige antistoffene. Nedbørslinjer dannes langs sidemarginene av den bevegelige grensen av antigen. Gradvis er antigenet tapt ved utfelling, slik at konsentrasjonen i forkant avtar og sidemarginene konvergerer til et skarpt punkt. Dermed er det resulterende mønsteret av utfelling lik en spike eller rakett.
Avstanden til spissen fra antigenbrønnen øker med økning i antigenkonsentrasjon. En standardkurve kan etableres ved bruk av kjente konsentrasjoner av antigener. Konsentrasjonen av et testantigen kan bestemmes ved interpolering av standardkurven med avstanden til raketten dannet.
Sensitiviteten til denne teknikken er ca. 0, 5 mg / ml. Laurell-teknikken brukes også til å oppdage antigener av kryptokokker, meningokokker og hemofilus i cerebrospinalvæske (CSF).
