3 Klassifiseringer av agglutineringsteknikker

Tre typer som agglutineringsteknikker av celler er klassifisert er: 1. direkte agglutinering, 2. indirekte (passiv) agglutinering og 3. revers (passiv) agglutinering.

1. Direkte Agglutineringstest:

Celler (som bakterier, sopp og erytrocytter) og uoppløselige partikkelformige antigener kan agglutineres direkte av deres spesifikke antistoffer. Antistoffet har to Fab-armer som det kan binde til antigener på to celler. På samme måte binder mange antistoffmolekyler med et antall celler for å danne en gitter.

Denne gitterformasjonen ses visuelt som klumper. Dermed representerer dannelse av klumper tilstedeværelsen av antigen-antistoff-binding. Mangel på agglutinering indikerer fraværet av antigen-antistoffreaksjon.

Bruk av direkte agglutineringstest:

en. Identifikasjon av mikrober:

De bakteriekolonier som dyrkes i kulturmedier, identifiseres ved bruk av kjent antisera mot mikrober. Det antimikrobielle antiserum som produserer synlig agglutinering identifiserer bakteriene.

b. Diagnostisering av mikrobielle infeksjoner ved å detektere tilstedeværelse av antistoffer mot mikrober i serum. Kjente mikrobielle antigener blandes med pasientens serum og forekomsten av agglutinering indikerer tilstedeværelsen av serumantistoffer mot mikroben.

c. ABO blodgruppering av humane erytrocytter (ved bruk av antisera).

Agglutinationstestene gjøres enten på lysbildet (glidemiddelagglutinationstest) eller i rør (røragglutineringstest).

Jeg. Slide agglutination test er enkel og enkel å utføre, og det trenger bare noen få minutter til å utføre testen.

ii. Tubeagglutinationstest brukes til å kvantifisere mengden av serumantistoffer mot en mikrobe ved seriell fortynning av serumet og deretter blanding av den fortynnede sera med konstant mengde mikrobielle antigener. Etter passende inkubasjon tas høyeste fortynning av serumet som viser synlig agglutinasjon som serumets titer (For eksempel, Widal-rørtest, Brucella-rørtest). Titeren reflekterer konsentrasjonen av antistoffer i serumet; høyere titer, mer er konsentrasjonen av antistoffer.

Lysbildeprøver for å oppdage serumantistoffer mot smittsomme stoffer brukes som første screeningstester. Seraen til de positive glidetestene bør testes ved hjelp av rørtester for å bekrefte resultatene for lysbildet. Lysprøven kan gi misvisende resultater, spesielt med svært høye serumantistoffnivåer (f.eks. Prozonfenomen med brucella-antistoffer).

Det er mye intern variasjon i agglutineringstestsystemene. Når serumtiterverdiene for en pasient blir kontrollert ved to anledninger, er forskjellen mellom titerverdiene signifikant, bare når titerverdiene varierer med minst to doble fortynninger [eller forskjell med to rør (fire ganger den første verdien) ] (for eksempel i Widal-rørtest, fortynnes serumet i to bretter: 1 i 20, 1 i 40, 1 i 80, 1 i 160, 1 i 320 og 1 i 640. Hvis en pasient har en første Widal-test titer på 1 i 160, den andre Widal testtiter er signifikant hvis den er 1 i 640 eller mer enn 1 i 640.)

Heterophile antistoff test:

(Ofte referert til som mono-spot test) Heterophile antistoff test er en hemagglutinering test for påvisning av antistoffer mot Epstein Barr (EB) virus som forårsaker infeksiøs mononucleosis sykdom. IgM-antistoffene dannet under infeksiøs mononukleose kryssreagerer med heste-RBC-overflateantigener (sannsynligvis på grunn av antigenisk likhet mellom EB-virus og heste-RBC-overflateproteiner) og forårsaker hemaglutinering.

Indirekte (passiv) agglutineringstest:

I den indirekte agglutineringstesten belaste kjente oppløselige antigener på andre celler (f.eks. Sauer eller kalkun erythrocytter) eller inerte partikler (f.eks. Latex, bentonitt, trekull, polystyren) som virker som passive bærere av antigener.

Mange antigener kan belegges på erytrocyter direkte eller etter å ha behandlet erytrocytene med formalin, tanninsyre eller glutaraldelyt. Fordelene med å bruke erytrocyter for belegg er deres enkle tilgjengelighet og lagringsevne. Dessuten er disse testene svært følsomme.

Testserum blandes med kjente antigenbelagte erytrocytter eller latex.

↓

Hvis testserumet har antistoffer agglutinerer erytrocytene eller latexpartiklene og produserer synlige klumper.

Hemagglutinasjonsanalyse:

Hemagglutinationstester er enkle og enkle å utføre. Både kvalitative og kvantitative tester kan utføres med hemagglutineringsteknikk.

Testserumet fortynnes serielt i en fortynningsoppløsning i mikrotiterplaten brønner.

↓

RBC belagt med et kjent antigen blir tilsatt i like mengder til alle brønnene. Egnede positive kontroll-, negative kontroll- og reagenskontroller brukes. Platen ristes godt og inkuberes på et sted fritt fra vibrasjoner.

↓

Etter inkuberingen leses platen med de blotte øynene for agglutinering.

Positive reaksjoner:

Brønner med agglutinasjon indikerer bindingen av antigenbelagte RBC med tilsvarende antistoffer i testserumet. Bunnen av den agglutinerte brønnen er beskrevet for å ha et teppeutseende.

Negativ reaksjon:

I brønner der det ikke foreligger antigen-antistoffbinding, oppstår ikke agglutinering av RBCs. På grunn av tyngdekraften setter RBCene seg ned til bunnen av brønnene og gir en "knapp" som utseende, hvor kanten på "knappen" er skarp og vanlig.

Antistofftiter av testserumet:

Serumfortynningen som gir 50 prosent agglutinering sammenlignet med brønnen som viser fullstendig (100 prosent) agglutinering er antistofftiteren av testserumet. Hemagglutineringssett er tilgjengelig for antistoffdeteksjon mot hepatitt B-virus, HIV, tyroglobulin, etc.

Gelatinpartikkelagglutinasjon:

Gelatinpartikler er alternative til erytrocytter for partikkelagglutineringstestene. Spesielle gelatinepartikler (ca. 3 μm diameter) har en svært hydrofil overflate, og derfor er det ingen uspesifikk binding av materialer som er tilstede i prøven. Gelatinpartikler fremstilles ved faseseparasjon og tredimensjonal tverrbinding ved 40 ° C. De resulterende partiklene blir fikset med formaldehyd eller gluteraldehyd.

Gelatinepartikler har ingen antigenicitet, og de er derfor fri fra problemene forbundet med hemaglutinasjonsanalyser (som heterofilantistoffene, som kan reagere ikke spesifikt med RBC og gi falsk positive agglutinasjoner i hemagglutinasjonsanalyser).

Latex agglutineringstest:

Bortsett fra erytrocytter og gelatin kan få andre partikler også brukes til å bære antigener på overflaten. Slike antigenbelagte partikler vil agglutinere når de blandes med spesifikke antistoffer. Protein- og polysakkaridantigener kan belegges på latexpartikler. Disse antigenbelagte partiklene vil agglutinere i nærvær av antistoffer.

Omvendt passiv hemagglutinasjonsanalyse:

I reverse passive hemagglutinasjonsanalyser er RBCene belagt med kjente antistoffer. Disse kitene brukes til å oppdage antigenene i testprøvene, slik som HB _s Ag i serumet.

Rose-Waaller Test:

Dette er en passiv hemagglutineringstest for å oppdage reumatoid faktor. En av egenskapene til human reumatoid faktor er at den kan binde med humant IgG samt kanin IgG. Får erythrocytter er belagt med subagglutinerende mengder anti-får IgG antistoffer (hevet i kanin). De reumatoid faktorene agglutinerer får erythrocytter belagt med kanin anti-får IgG.

Flockingstest:

Flocking er en annen type antigen-antistoffkompleksdannelsesanalyse, som brukes til å detektere og kvantifisere antistoffene. I motsetning til agglutinering og utfelling (hvor antigen-antistoffkompleksene settes ned til bunnen av røret), testes antigen-antistoff-kompleksene i flokkulering og forblir i suspensjon som flockinger, og resultatene leses under et mikroskop. Denne teknikken brukes i VDRL-testen (laboratorieundersøkelse for venereal sykdom) for å oppdage antistoffer mot Treponema pallidum, bakteriene som forårsaker syfilis.

Viral hemagglutinasjon:

Viral hemagglutinasjon er en spesiell kategori av erytrocytagglutinering, som ikke involverer antigen-antistoffreaksjon. Visse virus binder til overflateproteiner av RBC og denne bindingen fører til spontan agglutinering av RBC.

Spontan agglutinering av RBC med et virus kan forebygges av spesifikke antivirale antistoffer. Antistoffene mot viruset binder til virusoverflateantigenene og forhindrer vekselvirkning av virus og RBC, og derfor er ikke RBCene agglutinert. Det kalles viral hemagglutinasjonsinhiberingsanalyse og brukes til å kvantifisere virale antistoffer i serum hos pasienter.

Test for kald-agglutininer:

Antistoffer dannet under visse infeksjoner (spesielt Mycoplasma pneumoniae) og autoimmune sykdommer har en spesiell evne til å agglutinere RBCs ved 4 ° C. Disse antistoffene kalles kalde agglutininer.

Seriefortynninger av pasientens serum inkuberes med 1% RBC ved 4 ° C over natten.

↓

Rørene undersøkes for nærvær av agglutinering. Hvis agglutinering er tilstede, reinkuberes rørene ved 37 ° C.

↓

Deagglutinering av RBC ved 37 ° C indikerer at serumet har kalde agglutininer. Kald agglutininanalyse brukes til å diagnostisere Mycoplasma pneumoniae-infeksjon. 50 til 80 prosent av akutte Mycoplasma pneumoniae-infiserte pasienter har kaldt agglutinin som tilhører IgM-type.