Klinisk relevans av Coombs test (antiglobulintest)

Coombs test er en enkel og genial teknikk. Coombs test ble først beskrevet i 1908 av Moreschi og ble senere gjenoppdaget av RR Coombs og kollegaer i 1945 for å demonstrere ikke-agglutinerende antistoffer mot de røde blodcellene antigenene.

(Antistoffene kalles "ikke-agglutinerende" antistoffer fordi antistoffene ikke kunne forårsake agglutinering, til tross for deres binding med antigenene på RBC. Antistoffene er også noen ganger referert til som "ufullstendige antistoffer" som antistoffene ikke forårsaker agglutinering. Men det er ingen ufullstendighet i strukturen av antistoffmolekyl.)

De ikke-agglutinerende antistoffene binder faktisk til antigenene på overflaten av RBC. Men den forventede agglutinering av RBC forekommer ikke. Når et annet antistoff (kalt anti-antistoff eller antiglobulin) mot det RBC-bundne antistoffet tilsettes, oppstår agglutinering. Antiantistoffene binder til Fc-områdene av RBC-bundne antistoffer og danner en gitter som fører til agglutinering. Testen kalles antiglobulintest eller Coombs test.

Det finnes to typer anti-globulintester:

1. Direkte anti-globulin test (DAT)

2. Indirekte anti-globulintest (lAT)

1. Direkte anti-globulin test (DAT) brukes til å detektere antistoff, som er bundet til RBCer in vivo.

Vasket RBC fra en pasient blandes med anti-globulin.

↓

Anti-globuliner binder seg til ikke-agglutinerende antistoffer på overflaten av RBC og forårsaker synlig agglutinering. Testresultatet er DAT-positivt (figur 16.6).

Derfor foreslår en positiv DAT at pasientens RBC er belagt med ikke-agglutinerende antistoffer og pasienten sies å være DAT positiv.

Jeg. Positiv DAT oppstår med RBCer av nyfødte med hemolytisk sykdom hos nyfødte (RBCene av HDN er belagt med anti-Rh-antistoffer).

ii. For tiden brukes DAT til å oppdage IgG-antistoffer og C3b bundet til overflaten av RBCs. Hos pasienter som presenterer hemolyse, er DAT-testen nyttig for å avgjøre om hemolysen er av immunetiologi eller ikke.

Fig. 16.6: Coombs direkte agglutineringstest (DAT).

DAT brukes til å oppdage tilstedeværelsen av ikke-agglutinerende antistoffer bundet på overflaten av RBCs. A. Individens vasket RBC er blandet med anti-globulinreagenset. Anti-globuliner binder til Fc-områdene av de RBC-bundne antistoffene og forårsaker synlig agglutinering, og individet sies å være DAT-positivt. B. Hvis RBCene ikke er belagt med antistoffer, vil det ikke være agglutinering og individet sies å være DAT-negativt. DAT brukes også til å oppdage tilstedeværelsen av anti-Rh antistoffbelagte RBCer av nyfødte mistenkt å lide av hemolytisk sykdom hos nyfødte

Jeg. Ikke-immunforårsaker til hemolyse [som disseminert intravaskulær koagulering, mangel på røde blodlegemer [som glukose-6-fosfat dehydrogenase mangel (G6PD-mangel), røde cellemembranfeil (for eksempel arvelig sfærocytose, PNH) og hemoglobinopatier seglcelleanemi, thalassemi)] er DAT negativ.

ii. Immunårsaker til hemolyse (som autoimmun hemolytisk anemi, legemiddelinducert hemolyse, hemolytisk transfusjonsreaksjoner) er DAT-positive.

iii. En positiv DAT på grunn av C3 alene er observert hos pasienter med kalde autoantistoffer, paroksysmalt kaldt hemoglobinurea, og i noen tilfeller av medikamentinducerte hemolytiske anemier.

2. Indirekte agglutineringstest (IAT) brukes til å oppdage tilstedeværelsen av ubundne antistoffer mot RBC i serum hos en pasient.

Jeg. IAT for å oppdage anti-Rh-antistoffer i mors serum:

Mors serum blir inkubert med Rh-positive O blodgruppe RBCs. Hvis anti-Rh-antistoffer er tilstede i mors serum, vil antistoffene binde seg til RBCene. RBCene vaskes deretter.

↓

Deretter tilsettes anti-globulin-reagenset.

↓

Hvis anti-Rh antistoffer er tilstede i mors serum, vil RBCene være agglutinert og testen er positiv for IAT.

ii. IAT for å oppdage antistoffer i serum av en mottaker mot donor-RBC under blodtransfusjon:

IAT-test er allment ansatt (før blodtransfusjon) i kryssammenstillingen av giverens RBC med mottakers serum for å oppdage tilstedeværelse av antistoffer i mottakeren, noe som kan reagere med giverens RBC.

Vask Donorens RBC.

↓

Legg mottakers serum til RBCene og inkuber ved 37 ° C i 30 minutter.

↓

Vask RBCene.

↓

Legg til anti-globulin reagens.

Utvikling av agglutinering indikerer at mottakers serum har antistoffer mot donor-RBC og testen er rapportert som positiv for antistoffer. Et positivt IAT-resultat indikerer at det foreslåtte donorblodet ikke skal transfiseres til mottakeren i spørsmålet.

Gjeldende anti-globulin testreagens (også kalt Coombs 'reagens) preparater inneholder en "cocktail" av monoklonale antistoffer rettet mot humant IgG og C3b. (Binding av ikke-agglutinerende antistoffer mot RBC'er aktiverer komplement-systemet som resulterer i avsetting av C3b-fragmenter over RBCer, og derfor bortsett fra antistoffer, er RBCene belagt med C3b-fragmenter også).