Ulike kliniske undersøkelser og behandlinger for mistanke om immundefektssykdommer
Ulike kliniske undersøkelser og behandlinger for mistanke om immundefektssykdommer!
Redusere lymfocyttall (lymfopeni) hos små spedbarn garanterer rask undersøkelse for immundefekt.
Normale nyfødte og små spedbarn har høyere lymfocyttall enn eldre barn og voksne. Imidlertid utelukker ikke normal eller økt antall lymfocytter hos spedbarn og små barn muligheten for primære immunsviktssykdommer fordi graft versus host (GVH) reaksjonen ikke kan være åpenbar hos alle pasientene.
A. Evaluering av en mistenkt immunbrist pasient begynner med følgende undersøkelser:
Jeg. Hemoglobin, Mean cell hemoglobin (MCH), Mean cell hemoglobin konsentrasjon (MCHC)
ii. RBCs nummer. Hematokrit (HCT), gjennomsnittlig cellevolum (MCV), retikulocyttall.
iii. Totalt antall WBCs. Total lymfocyttall: De fleste SCID-pasienter med tymisk hypoplasi har vedvarende lave nivåer av lymfocyttall. Imidlertid utelukker et normalt lymfocyttall ikke SCID. Videre kan lymfopeni være sekundær mot virusinfeksjoner, underernæring, cellefeil, autoimmune lidelser og myelopatier.
iv. Differensiell leukocyttelling (Neutrofiler, lymfocytter, eosinofiler, basofiler og monocytter)
v. Absolutt antall neutrofiler, basofiler, eosinofiler, monocytter og lymfocytter.
vi. Erytrocytt sedimenteringshastighet (ESR)
vii. Antall blodplater
viii. Serum natrium, kalium, kalsium, klorid og glukose nivåer.
ix. Perifer blodsmerteundersøkelse
Videre vurdering av immunologisk kompetanse kan gjøres ved følgende undersøkelser.
B. Immunoglobuliner og antistoffer:
Serumnivåer av immunglobuliner:
Serumnivåer av IgG, IgM, IgA, IgE og IgD måles kvantitativt ved bruk av radiell immunodiffusjon, automatisert immunoturbidometri, radioimmunassay eller ELISA-teknikker. Serumimmunoglobulinkonsentrasjonene varierer med alder og miljø. Derfor skal det brukes riktige regionale og etniske aldersrelaterte og kjønnsrelaterte normer.
Konsentrasjoner av immunoglobuliner kan ikke brukes som eneste kriterium for diagnose av primær immundefekt. Lavt nivå av immunoglobuliner kan også skyldes reduksjon i syntese eller på grunn av tap av immunglobuliner. En indirekte indikasjon på tap kan oppnås ved å måle serumalbumin, som vanligvis går tapt samtidig (f.eks. Gjennom gastrointestinale eller nyretanker).
Normale verdier for immunglobulin-underklasser er tilgjengelige. Men områdene i normale barn er svært brede og påvirkes av genetiske og geografiske variasjoner.
Immunoelektroforese og immunfiksering er nyttige ved påvisning av M-komponenter.
Naturlige antistoffer mot blodgruppene A- og B-antigener:
Naturlige antistoffer mot blodgruppene A- og B-antigener undersøkes noen ganger som et mål på pasientens evne til å produsere IgM-antistoffer mot karbohydratantigener.
Spesifikk antistoffproduksjon etter immunisering:
Normale intervall av IgG-antistoffer hos barn som følger immuniseringer er tilgjengelige. Men forsiktig tolkning er nødvendig.
Levende vaksiner (som oral polio-vaksine, BCG, meslinger, rubella og kusma) bør aldri gis når primær immundefekt mistenkes. Levende vaksiner bør ikke også gis til andre familiemedlemmer også.
Jeg. Unimmunized barn:
en. Difteri / tetanus (DT) eller Hib (Haemophilus influenzae type b) konjugatvacciner kan gis i anbefalte doser til pasienten. Blod tas 3 uker etter siste immunisering, og IgG antistoffer mot injiserte antigener måles ved hjelp av ELISA teknikk.
En Schick-test kan utføres for difteri-antistoffer.
b. Tre doser av drept poliomyelitt-vaksine (1, 0 ml intramuskulært med intervaller på 2 uker) kan også brukes. To uker etter siste injeksjon kontrolleres blod for spesifikke antistoffer ved virus nøytraliseringsmetode.
ii. Barn som allerede er immunisert med DPT- eller DT- eller Hib-konjugatvaccin:
en. Serum IgG antistoffer mot difteri, tetanus, pertusis og Haemophilus influenzae type b måles. Hvis antistofftiterne er lave, blir en boosterinjeksjon gitt og senere blir antistoffnivåene målt.
Schick-test kan også utføres for å detektere antistoff mot difteri.
Ekstra aktive immuniseringer som kan brukes:
Jeg. IgG-antistoffresponser mot rent karbohydratantigener:
Pneumococcus polysakkarid / meningococcus polysakkarid / Haemophilus influenzae type b polysakkarid (fri for bærerproteiner) / tyfoid VI antigener kan injiseres og serum IgG antistoffer mot de injiserte antigenene måles fra blodprøvene tatt 3 uker etter injeksjonen. (Disse polysakkaridene og andre rene polysakkaridantigener er ikke nyttige hos spedbarn under 2 år. Videre er tolkning av resultatene hos barn under 5 år vanskelig fordi alderen der responsen utvikler seg, varierer fra 2-4 år.)
ii. Hepatitt A-vaksine
iii. Hepatitt B-vaksine er ikke et pålitelig antigen for testing av immunokompetansen. Fordi det er en høyfrekvens av ikke-respondere i befolkningen, spesielt hos pasienter over 40 år.
C. B lymfocytt nummer:
Flowcytometri ved bruk av fluorescerende merkede CD19- og CD20-monoklonale antistoffer brukes til å telle antall B-celler. Immunocytologisk metode kan brukes til å telle prosentandelen av B-celler i helblodsfilm.
Pre-B-celler i benmargsaspiratet identifiseres med rensede flurokrom-merkede antistoffer for å oppdage cytoplasmatiske μ-tunge kjeder i C019 + -celler.
D. T-lymfocytt Antall:
Flowcytometer ved bruk av fluorescerende merkede monoklonale antistoffer mot CD3 brukes til å telle totalt antall T-celler. Fluorescerende merkede CD4- og CDS-monoklonale antistoffer benyttes henholdsvis tallrike T-celler og cytotoksiske T-celler.
Ved mistanke om hyper IgM-immundefekt aktiveres T-celler først av PMA og innenycin og analyseres deretter for ekspresjon av CD40-ligand (CD40L) på overflaten.
In vitro stimulering av lymfocytter:
Lymfocytter kan aktiveres in vitro av følgende midler:
Jeg. mitogener:
Phytohemagglutinin (PHA), Pokeweed mitogen (PWM), Concanavalin (Con A).
ii. antigener:
PPD, Candida, streptokinase, tetanus toksoid og difteritoksoid.
iii. Allogene celler.
iv. Antistoffer mot T-celleoverflatemolekyler involvert i signaltransduksjon som CDS, CD2, CD28 og CD43.
Etter aktivering kan de aktiverte lymfocytter detekteres ved hjelp av følgende metoder:
1. Påvisning av uttrykk for aktivering maricere:
Aktiverte T-celler uttrykker CD69, IL-2 reseptor a (CD25), transferrinreseptor (CD71) og MHC klasse II molekyler (hvilende T-celler uttrykker ikke eller uttrykker bare få MHC klasse II molekyler). 1-2 dager etter stimulering av T-celler med et mitogen (slik som PHA), undersøkes cellene med strømningscytometer ved bruk av fluorescerende merkede monoklonale antistoffer mot CD25-, CD71- eller MHC-klasse II-molekyler.
2. Deteksjon av biastogen respons i aktiverte T-celler:
De mononukleære celler stimuleres med et mitogen og deretter tilsettes 3 H eller 14 C-merket tymidin til kulturen. 16-24 timer senere utsettes cellene og mengden av radio nukleotidmateriale innlemmet i cellene telles i væskescintillasjonstelleren. Radio nukleotid tellingen brukes som et mål for T-celle aktivering.
3. Blandet lymfocyttreaksjon (MLC).
4. Kvantifisering av IL-2 utskilt av aktiverte T-celler:
Perifere blodmononukleære celler stimuleres med et mitogen i et in vitro-celledyrkningssystem. Supernatanten oppsamles deretter, og mengden av IL-2 i supernatanten kvantifiseres ved bruk av ELISA-metode eller 3 H-tymidinopptak av mus-IL-2-avhengige dyrkede T-cellelinjer (f.eks. CTLL2).
F. Hudtesting:
Kusje, trichophyton, renset proteinderivat (PPD), Candida, tetanus toxoid og difteritoksoid er antigenene som vanligvis brukes til å fremkalle forsinket type overfølsomhet (DTH) reaksjon i huden. For å vurdere feil CMI-respons må flere antigener testes. 0, 1 ml av hvert antigen injiseres intradermalt og den maksimale diameteren av indurasjon måles 48-72 timer etter injeksjon.
En positiv DTH-respons er informativ. Videre påvirkes DTH-responsen av alder, steroidbehandling, alvorlig sykdom og nylige immuniseringer. Men negative DTH-svar er vanskelige å tolke (spesielt hos spedbarn og småbarn) fordi de kanskje ikke har vært utsatt for tidligere (dvs. sensitivisert) til de testede antigenene.
G. NK-celler:
Fluorescerende merkede monoklonale antistoffer mot CD16, CD56 og CD57 brukes i et strømningscytometer for å telle antall NK-celler. NK-cellefunksjonell aktivitet kan vurderes ved hjelp av en cytotoksisitetsanalyse mot cellelinjer som K562.
H. Total hemolytisk komplement:
Total hemolytisk komplement og individuelle komplementkomponenter av klassiske og alternative komplementveier.
I. Fagocytiske funksjoner:
Jeg. Nitroblått tetrazoliumfargestimuleringstest
ii. Måling av O 2 - radikal dannelse etter stimulering av blodceller ved bruk av PMA eller diklorfluorin.
iii. Kvantitasjon av fagocyternes kapasitet til å innta og drepe stafylokokker eller parakolobaciller.
iv. Integriteten til inflammatorisk respons kan testes med Rebuk hudvinduteknikk.
v. Måling av kjemotaksier, kjemokiner og evnen til å produsere og frigjøre utvalgte inflammatoriske cytokiner.
vi. Vurdering av uttrykk for adhesjonsmolekyler (f.eks. CD18).
J. Bone Marrow Aspiration eller Benmarg Biopsi:
Benmarg aspirasjon brukes til identifikasjon av plasmaceller og pre-B-celler. Benmarvsbiopsi eller aspirasjon brukes også til å utelukke andre sykdommer, samt å diagnostisere obskure infeksjoner.
K. lymfeknudebiopsi:
Lymfeknudebiopsi er ikke nødvendig for å diagnostisere de fleste immunsviktssykdommer. Likevel kan det være nyttig. Raskt forstørrende lymfeknuter bør biopsieres for å finne infeksjon, malignitet eller follikulær hyperplasi. Men lymfeknudebiopsi er potensielt farlig i SCID-pasienter fordi de helbreder sakte og kan fungere som en portal for inntak av mikrober inn i pasienten.
L rektal og tarmbiopsi:
Hos pasienter med vanlig variabel immundefekt og selektive IgA-mangelundersøkelser av rektalt vev for plasmaceller og lymfoide celler kan være nyttige. Lymfoidceller finnes i rektal og tarmbiopsier hos normale spedbarn i alderen mer enn 15-20 dager. Jejunal biopsi kan vise villøs atrofi og kan vise Giardia lamblia og Cryptosporidium infeksjoner.
M. Hudbiopsi:
Hudbiopsi er nyttig for å etablere en diagnose av GVH-reaksjon hos immundefektpatienter etter blodtransfusjon, beinmargstransplantasjon, fostervevstransplantasjon. Hudbiopsi er også nyttig for å bestemme GVH reaksjon på grunn av overføring av lymfocytter i utero fra mor til foster under svangerskapet.
N. Thymus Biopsy:
Thymus biopsi utføres bare når tymoma er mistenkt.
Kimerisme (forekomst hos ett individ av to genetisk forskjellige cellelinjer):
Når en person mottar celler (som WBCer) fra et annet genetisk forskjellig individ, har mottakeren to genetisk forskjellige celletyper (en celletype av mottakeren selv og den andre fra giveren) og det kalles chimerisme. Under graviditet kan moderlymfocytter gå inn i føtal sirkulasjon og følgelig sies chimerismen å være medfødt chimerisme.
Ved blodtransfusjon / beinmargstransplantasjon / fostervevstransplantasjon blir cellene fra et annet genetisk forskjellig individ introdusert i pasienten og kimerismen sies å være ervervet chimerisme. Tilstedeværelsen og opprinnelsen til lymfoide kimære celler kan fastslås ved karyotyping / HL A-typing / annen antigen-typing og analyse av høypolymorfe markører.
O. Spesielle undersøkelser:
Jeg. Adenosin deaminase (ADA) og purin nukleosidfosfatase (PNP) enzymnivåer bør bestemmes hos alle pasienter som mistenkes å ha SCID- og T-cellefeil.
ii. Serum-alfa-fetoproteinnivå kan være nyttig ved separering av pasienter med ataksi-telangiektasi fra pasienter med andre nevrologiske lidelser. Serum-alfa-fetoproteinnivå økes (40-2000 mg / L) hos minst 95 prosent av ataksi-telangiektasipasienter.
iii. Blodmononukleære celler av SCID-pasienter bør undersøkes for tilstedeværelse av MHC klasse II-molekyler (for å utelukke muligheten for MHC klasse II-mangel).
iv. Cytogenanalyse er nyttig ved diagnose av ataksi-telangiektasi og annet kromosomalt bruddssyndrom.
v. Molekylære cytogenetiske studier er nyttige ved diagnostisering av DiGeorge syndrom og informativ under andre forhold.
vi. Analyse av genet på molekylært nivå samt demonstrasjon av genproduktene.
P. Isolering og identifikasjon av smittsomme agenter:
Hos pasienter med immundefekt er diagnose av virale infeksjoner ved antistoffbestemmelse av liten eller ingen verdi fordi selve antistoffproduksjonen er defekt. Derfor er isolering og identifikasjon av viruset avgjørende. Direkte viral isolasjon ved viruskulturmetoder eller PCR-metode for å identifisere virusgenomet er nødvendig. CSF kulturer er essensielle i tilfeller der infeksjon i sentralnervesystemet er mistenkt. Bronkialspray kan være nyttig ved diagnosen Pnumocystis carinii og andre respiratoriske patogener. HIV-infeksjonen bør utelukkes ved western blot og PCR tester for HIV.
Q. Prenatal Diagnose (dvs. Diagnose Før Barnets Fødsel):
Prenatal diagnose kan gjøres fra føtale blodprøve, amnionceller og chorionisk villusbiopsi.
Jeg. Fraværet av T- eller B-celler i fostrets navlestrengsblod kan brukes til prenatal diagnose av henholdsvis SCID og X-koblet agammaglobulinemi. Når det er mulig, bør prenatal diagnose ledsages av molekylære tester.
ii. Fravær av cellemembrankomponenter som MHC klasse II molekyler og CD18 på føtale blodceller kan identifisere henholdsvis MHC klasse II mangel og leukocytt adhesjonstype 1.
iii. ADA-mangel og PNP-mangel i fosteret kan diagnostiseres fra chorioniske villi eller føtale blodprøver.
R. Genetisk bærerdeteksjon:
Nylige fremskritt i den nøyaktige kartleggingen av de ulike immunsviktssykdommene og tilgjengeligheten av høyt polymorfe markører bidrar til å påvise detektering og prenatal diagnose.
Jeg. Hvor genets plassering er blitt identifisert, kan polymorfe markører identifisere bærere med rimelig sikkerhet i informative familier.
ii. Hvis spesifikk enzym- eller komplementkomponentmangel er identifisert, kan heterogene bærere i familien fastslås fra redusert nivå av enzymet eller den spesifikke komplementkomponent i spørsmålet.
