Immunohistokemiske analyseteknikker for å detektere tumorantigener
Immunohistokemiske analyser er mye brukt til å detektere tumorantigener og å klassifisere lymfocyttcelletyper i kirurgiske patologiseksjoner.
Vevsprøven er festet på en glassglass.
↓
Enzymmerket mAb (konjugat) lagres over prøven og inkuberes.
Jeg. Hvis prøven har spesifikt antigen mot mAb, binder konjugatet til antigenet på prøven.
↓
Etter vask blir substrat tilsatt og inkubert.
Jeg. Utvikling av farge angir at spesifikt antigen mot mAb er tilstede i vevsdelen.
ii. I fravær av spesifikt antigen er det ingen fargeutvikling.
↓
Lysbildet er vasket og vevsnittet ses under mikroskopet for tilstedeværelse av farge.
Pepperrotperoxidase (HRP) er enzymet som vanligvis brukes i immunhistokemiske teknikker. Underlaget for HRP er hydrogenperoksid og diamino-benzidin. Reaksjonen av HRP med diaminobenzidin gir en svart farge.
Peroksidase-antiperoksidase (PAP) er en annen metode som brukes i kirurgisk patologi for å oppdage enzymer og tumorrelaterte antigener.
Det er en tre-trinns metode:
Trinn 1:
Vevet som mistenkes å ha et bestemt antigen, er festet til en glassglass.
↓
Kjent kaninantikropp mot det aktuelle antigenet blir tapt på vevet (antatt å ha antigenet) festet til et glassglass.
Jeg. Hvis det tilsvarende antigenet er i vevet, binder antistoffet seg til det. Lysbildet vaskes etter inkubering.
↓
Steg 2:
Anti-kaninimmunoglobulin (kalt linkantistoff) blir tapt på lysbildet.
Jeg. Hvis det første kaninantistoffet forekommer i lysbildet (bundet til antigenet) binder anti-kaninimmunoglobulinet til kaninantistoffet. Etter inkubasjon blir lysbildet vasket.
↓
Trinn 3:
En immunkompleks, bestående av kaninantistoffer mot peroksidase, kombinert med peroksidase, blir droppet. Dette kaninantistoffet vil binde til anti-kanin-immunoglobinet (link-antistoff-trinn 2) gjennom dets Fc-region. Etter inkubasjon blir lysbildet vasket.
↓
Endelig tilsettes peroksidasubstrat. Substratet vil reagere med peroksidase som resulterer i dannelsen av et farget produkt som ses under mikroskop.
Jeg. Tilstedeværelse av det fargede produktet på vevet indikerer tilstedeværelsen av det tilsvarende antigen.
ii. Fravær av det fargede produktet på lysbildet indikerer at antigenet i spørsmålet er fraværende i vevet.
