Fenylalanin deaminiserer test på bakterier for å finne ut deres evne til å deaminere aminosyren (med figur)

Les denne artikkelen for å lære om fenylalanin deaminiser testen på bakterier for å finne ut deres evne til å deaminere aminosyren!

Prinsipp:

Noen bakterier har evne til å deaminere aminosyren fenylalanin, da de kan produsere enzymet 'fenylalanin deaminase'.

Dette enzymet deaminerer fenylalanin ved å fjerne aminogruppen, hvorved det produseres fenylpyruvinsyre (en keto-syre) og ammoniakk (NH3). Fenylpyruvsyre danner grønn farge med jernkloridoppløsning.

I fenylalanin-deaminase-testen blir testbakterien vokst på agar-skråninger inneholdende fenylalanin. Hvis bakteriene har muligheten til å deaminere fenylalanin, endres fargene på skråene fra gul til grønn, ved å slippe av kloridkloridoppløsningen på den.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminarflammekammer, disponere krukke, inkubator, fenylalaninagar, ferrikloridoppløsning (10%), isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene av fenylalaninagarmedium (som inneholder fenylalanin som hovedkomponentene) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml av mediet, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og virvling ( Figur 7.17).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 7.2 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre.

3. Kolben oppvarmes for å oppløse agaret i mediet helt.

4. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand i 5 reagensrør (ca. 20 ml hver).

5. Testrørene er bomullspluggede, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

6. De blir sterilisert ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Etter sterilisering fjernes de fra autoklaven og holdes i en skrå stilling for å avkjøle og størkne mediet for å få fenylalanin-agar-skråninger.

8. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, ved å strekke på overflaten av skråene ved hjelp av en flamme-sterilisert sløyfe. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

9. Inokulerte skråninger inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i en inkubator.

10. 4-5 dråper ferrikloridoppløsning (10%) tilsettes til hver skråning.