Teknikker brukt i Human Genome Project

Noen av de viktige teknikkene som brukes i det menneskelige genomprosjektet er som følger:

(a) DNA-sekvensering er sekvenseringsmetodene for å bestemme rekkefølgen av nukleotidbasene-adenin, guanin, cytosin og tymin i et molekyl av DNA. Det er to vanlige metoder, nemlig Maxam Gilbert-teknikk som bruker kjemikalier til å spalte DNA i fragmenter på bestemte baser; eller, oftest, Sanger-teknikken.

Det kalles også di-deoksy- eller kjedeavslutningsmetoden. Den bruker DNA-polymerase til å lage nye DNA-kjeder, i nærvær av di-deoksynukleotider kjede terminatorer for å stoppe kjeden tilfeldig når den vokser. I begge tilfeller separeres DNA-fragmentene i henhold til lengden ved polyakrylamidgelelektroforese. Dette gjør at sekvensen kan leses direkte fra gelen.

(b) Ansettelse av begrensningsfragmentlengdepolymorfier (RFLP).

(c) Gjær kunstige kromosomer (YAC) er en vektor (bærer) opprettet og brukt i laboratoriet for å klone DNA-deler. En YAC er konstruert fra de telomeriske, sentromere og replikasjons-opprinnelses-sekvensene som trengs for replikasjon i gjærceller. Telomeren er enden av kromosomet; sentromeren er kromosomområdet som spindelfibrene fester under celledeling; og replikasjons-opprinnelses-sekvensene er de stedene hvor replikering av DNA starter.

(d) Bakterielle kunstige kromosomer (BAC) er et stort segment av DNA (100.000-200.000 bp) fra en annen art klonet inn i bakterier. Etter at det fremmede DNA har blitt klonet inn i vertsbakteriene, kan mange kopier av det bli gjort. Det er en stor innsatskloningsvektor som er i stand til å håndtere store segmenter av klonet DNA, typisk rundt 150 kb. BAC kan spres i laboratoriestammer av Escherichia coli. Disse vektorene er nyttige i konstruksjonen av genomiske biblioteker for genomskala-sekvenseringsprosjekter.

(e) Polymerase Chain Reaction (PCR).

(f) Elektroforese.