Immunofluorescens brukes til påvisning av antigener i celler
Immunofluorescens brukes til å påvise antigener i celler!
Fluorescerende forbindelser som immunokjemiske for å detektere antigener i vev ble introdusert av Coons (1941).
Immunofluorescens brukes til påvisning av antigener i celler eller vev (ved bruk av kjente antistoffer) samt påvisning av antistoffer i serum (ved bruk av kjente antigener). Fluorescens er utslipp av lys av en farge når stoffet er utsatt for et lys av en annen farge. Når en fluorescerende substans er begeistret med et lys med bestemt bølgelengde absorberer lyset og avgir et lys av en annen bølgelengde.
Jeg. Fluorescein isothiocyanate (FITC) har en maksimal lysintensitet ved 490-495 nm, og det avgir lyset ved 530 nm (grønn farge).
ii. Tetrametyl rhodamin isothiocyanat har en maksimal lysintensitet ved 550 nm og gir rødt fargelyst (580 nm).
en. Direkte immunfluorescens:
Denne teknikken brukes til å oppdage antigener i celler eller vev.
Vevet, som har ukjent antigen, er festet til en glassglass.
↓
Kjent antiserum (spesifikt for antigenet av interesse) konjugert til FIT (kjent som konjugat) lagres på vevet og inkuberes.
Jeg. Hvis antigenet av interesse er i vevet, binder konjugatet til antigenet.
↓
Deretter vaskes lysbildet for å fjerne ubundet konjugat.
↓
Lysbildet blir så sett under fluorescerende mikroskop.
Jeg. Lys grønn farge vil bli sett hvis det er antigen i vevet.
ii. Hvis det ikke er noe antigen i vevet, ville alt konjugatet ha blitt vasket under vasketrinnet og derfor er det ingen grønn farge.
Denne teknikken brukes også til å oppdage nærvær av bakterielle eller virale antigener i infiserte vev.
b. Indirekte immunfluorescens:
Denne teknikken brukes til å oppdage antistoffer i serumet.
Celler som inneholder kjente antigener er festet til glassglass.
↓
Testserumet blir tilsatt over lysbildet og inkubert.
Jeg. Hvis det er antistoffer (mot antigenene i celler) i serum, vil antistoffene binde til antigenene i celler.
↓
Deretter vaskes lysbildet for å fjerne ubundne serumkomponenter.
↓
Anti-humant immunglobulin konjugert til FITC tilsettes og inkuberes.
Jeg. Det FITC-konjugerte anti-humane immunoglobulinet vil binde til serumantistoffene bundet til celleantigener.
↓
Etter vask blir lysbildet sett under fluorescerende mikroskop.
Jeg. Tilstedeværelse av lysegrønn farge indikerer at serumet har antistoffer mot antigenene i cellene.
ii. Fravær av grønn farge indikerer fraværet av serumantistoffer mot antigenene i de anvendte cellene.
