Nyttige notater om lymfocyttaktivering
De funksjonelle egenskapene til lymfocytter som svar på antigener eller mitogener bestemmes ved hjelp av lymfocytaktiveringstest.
Derfor er lymfocytaktiveringstestene mer hensiktsmessige for å vurdere individets immunokompetanse enn en enkel oppregning av lymfocytter.
Det er to typer lymfocytaktiveringstest:
Jeg. Påvisning av 'aktiveringsmarkører' på lymfocyttoverflaten.
ii. Vurdering av lymfocytes evne til å proliferere etter T-celle stimulering.
De mest brukte T-cellestimulatorene for å vurdere T-lymfocyttproliferasjon er:
Jeg. Lectins [som fytohemagglutinin (PHA) og concanavalin A (ConA)
ii. Bakterielle toksiner som fungerer som superantigener
iii. Kjemiske forbindelser [som fobal myristatacetat (PMA), kalsiumionophorer
iv. cytokiner
v. mAbs til overflate reseptorer (spesielt CD3 molekyler på T-celler)
B-celleaktivering er indusert av:
Jeg. Pokeweed mitogen (PWM). PWM aktiverer også T-celler
ii. Super antigener
iii. lipopolysakkarider
iv. mAbs som kryss-linker på B-celleoverflaten.
en. Rensede lymfocytter dyrkes i 96-brønns mikrotiterbrønner og stimuleres med antigen eller mitogen (vanligvis i 48 timer).
↓
Tritiert tymidin (3H-Tdr) tilsettes brønnene og inkuberes
↓
Innholdet i brønnene suges gjennom og filtreres på filtre og mengden 3 H Tdr i filterpapiret måles. Inkorporeringen av 3 H-Tdr i kromosomal DNA reflekterer celleproliferasjon.
b. Det er ikke-radioaktive analyser for å bestemme proliferasjonen av celler. Disse analysene bruker fluorescerende fargestoffer som innarbeider i DNA eller fargestoffer som måler oksidativ respirasjon som MTT.
c. Bromodeoksyuridin (BrdU) inkorporeres i DNAet av svært replikerende celler og kan derfor brukes til å vurdere celleproliferasjon. Den innlemmede BrdU i celler detekteres ved bruk av mAbs mot BrdU og strømningscytometri (som påvisning av intracellulære antigener ved hjelp av flytcytometri).
BrdU kan også administreres til kreftpasienter in vivo og senere kan svulsten resekteres og tumorcellene kan vurderes for inkorporering av BrdU. Denne analysen gir en ide om den proliferative fraksjon av tumorceller i en pasient.
d. Cytotoksisk T-celleaktivering er analysert ved 51 kromfrigivelsesanalyse:
Målceller er merket med radioaktivt krom ( 51 Cr), som binder til intracellulære proteiner fra målceller.
↓
De merkede målceller inkuberes med cytotoksiske T-celler.
↓
Målcellelys av de cytolytiske T-cellene resulterer i frigjøring av 51 Cr.
Cellene blir sentrifugert og den frigjorte 51 Cr i supernatanten måles. Mengden frigjort 51 Cr er proporsjonal med lysis av celler.
