Eksperiment for å finne ut bakteriens evne til å dekarboksylere forskjellige aminosyrer (med figur)

Eksperiment for å finne ut Bakteriernes evne til å dekarboksylere forskjellige aminosyrer!

Prinsipp:

Noen bakterier har evnen til å dekarboksylere forskjellige aminosyrer til tilsvarende aminer og CO ₂ da de kan produsere respektive "aminosyre dekarboksylase" enzymer.

Blant dem kan hver bakterie dekarboksylere bare noen av aminosyrene, mens den ikke kan dekarboksylere de andre.

Dermed kan aminosyrene, som en bakterier kan dekarboksylere og aminosyrene, som det ikke kan være karakteristisk for bakteriene. Aminosyre-dekarboksylase-testen utføres for å teste, separat, evne til en bakterier til å dekarboksylere aminosyrer som lysin, ornitin og argentin med produksjon av C02 og respektive aminer som cadaverin, putrescin og agmatin.

Hvis bakteriene kan

dekarboksylerer noen eller flere av aminosyrene, respektive aminer fremstilles, som er alkaliske (grunnleggende) og derfor øker pH-verdien som forandrer fargen på bromokresol-lilla fra gul til lilla.

I aminosyredekarboksylase-testen blir testbakteriene dyrket anaerobt i et kjøttmedium som inneholder glukose, bromokresolpurpur og en av aminosyrene. Fargen på buljongen endres i utgangspunktet fra lilla til gul på grunn av fallet i pH som følge av syrer fremstilt ved gjæring av glukose. Hvis bakteriene har evnen til å dekarboksylere aminosyren, endres kjøttens farge fra gul tilbake til lilla.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminar-strømningskammer, disponere krukke, inkubator, aminosyre-dekarboksylasebuljong, aminosyrer (lysin, ornitin, arginin), flytende paraffin, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterie.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene i aminosyre-dekarboksylase-kjøttmedium (inneholdende glukose og bromokresolpurpur som hovedkomponentene) eller dets ferdige pulver som kreves for 400 ml kjøttkraft, veies og oppløses i 400 ml destillert vann i en 500 ml konisk kolbe ved å riste og hvirvle (figur 7.11).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 7.2 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre. Kolben oppvarmes, hvis nødvendig, for å oppløse ingrediensene helt.

3. 400 ml kjøttkraft fordeles i fire 250 ml koniske kolber, slik at hver kolbe inneholder 100 ml kjøttkraft.

4. Til tre av disse kolber blir tre aminosyrer, slik som lysin, ornitin og arginin, tilsatt separat (0, 5 gram hver) og en holdes uten noen aminosyre for å tjene som kontroll. Kontrollen brukes til å skille mellom to-trinns fargeendringer i testmediet (dvs. fra lilla til gul og fra gul tilbake til lilla).

5. Kjøttene i de fire koniske kolber fordeles i fire separate sett med reagensrør (ca. 10 ml hver), bomullspluggede, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

6. Brothørrørene steriliseres ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Kjøttboksene får lov å avkjøles til romtemperatur.

8. Flytende paraffin steriliseres ved oppvarming ved 180 ° C i 3 timer i en varmluftsovn.

9. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i buljongen ved hjelp av en inokuleringssløyf sterilisert over bunsenflammen. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

10. Den steriliserte flytende paraffin helles forsiktig aseptisk i de inokulerte rørene (ca. 1 cm høyt på mediet) for å gi anaerob tilstand.

11. De inokulerte buljongrørene inkuberes ved 37 ° C i en inkubator og observeres daglig til testen er positiv eller i maksimal periode på 4 dager.